Mecanismos de ativação plaquetária na dengue: contribuições para a patogênese / Mechanisms for platelet activation in dengue: contributions to the pathogenesis

A dengue é a arbovirose humana mais prevalente no mundo. A infecção pelo vírus da dengue (DENV) tem um vasto espectro de sintomas, causando desde febre auto-limitada até casos graves com sangramento e choque podendo evoluir para o óbito. Apesar de plaquetopenia ser frequentemente observada em pacientes com dengue, a participação das plaquetas na patogênese da dengue permanece pouco explorada. Nós inicialmente investigamos a ativação plaquetária em pacientes com dengue ou em plaquetas expostas ao DENV in vitro. Na tentativa de associar a ativação plaquetária com mecanismos imunopatogênicos da dengue, a secreção de citocinas e quimiocinas em plaquetas estimuladas com o DENV e a síntese de IL-1beta em plaquetas de pacientes com dengue foram investigadas. Os mecanismos envolvidos no processamento e secreção da IL-1beta, bem como suas contribuições para a permeabilidade endotelial também foram objetos de estudo. A formação de agregados plaqueta-monócito e a expressão de marcadores de ativação de monócitos também foram avaliados em pacientes com dengue. Finalmente, nós investigamos o impacto da apoptose de plaquetas na dengue e sua relação com o desfecho de plaquetopenia. Nossos resultados indicam intensa ativação plaquetária em pacientes com dengue, especialmente em pacientes com dengue grave. Nós observamos uma expressão elevada de IL-1beta em plaquetas e micropartículas (MP) derivadas de plaquetas de pacientes com dengue, ou após a exposição de plaquetas ao DENV in vitro...

Dengue is the most frequent hemorrhagic viral disease and re-emergent infection in theworld. Dengue infection has a large spectrum of clinical manifestations from self-limitedfebrile illness to severe syndromes accompanied by bleeding and shock. Althoughthrombocytopenia is characteristically observed in mild and severe forms of dengue, therole of platelet activation in dengue pathogenesis has not been fully elucidated. Wehypothesize that platelet activation have major roles in inflammatory amplification andincreased vascular permeability during severe forms of dengue. Here we investigate plateletactivation in patients with dengue or in platelets exposed to DENV in vitro. The secretionof cytokines and chemokines in DENV-stimulated platelets and the synthesis of IL-1 beta inplatelets from patients with dengue were investigated. The mechanisms involved inprocessing and secretion of IL-1beta, as well as potential contribution of these events toendothelial permeability during infection were also evaluated. Platelet-monocyteaggregates formation and markers of monocyte activation were evaluated in patients withdengue. Finally, we investigated the impact of platelet apoptosis in dengue-associatedthrombocytopenia. Our results show increased platelet activation in patients with dengue,especially patients with severe dengue...

Caracterização da interação entre vírus da dengue e plaquetas humanas: ativação plaquetária, função mitocondrial e secreção de citocinas / Characterization of the interaction between dengue virus and human platelets: platelet activation, mitochondrial function and cytokine secretion

A Dengue é considerada, hoje, a principal arbovirose humana no mundo, infectando milhões de pessoas e causando milhares de mortes anualmente. A infecção pode ser assintomática ou pode causar doenças com quadro clínico variado, que inclui desde quadros febris sem maiores complicações até quadros graves de sangramento e choque, nos quais plaquetopenia e aumento de permeabilidade vascular estão frequentemente presentes. A interação direta do vírus da dengue (DENV) com plaquetas parece ser um importante mecanismo implicado na plaqueotopenia de pacientes com dengue, portanto a identificação e compreensão dos mecanismos envolvidos nesse processo serão de grande valia para a determinação de mercadores de gravidade e para o desenvolvimento de novos alvos terapêuticos visando prevenção e/ou resolução da febre hemorrágica do dengue/ síndrome do choque por dengue (FHD/SCD). Nesse trabalho, buscamos caracterizar os efeitos diretos do DENV-2 sobre a ativação e o metabolismo energético de plaquetas humanas a partir de um modelo de interação plaqueta-DENV in vitro. Nossos resultados mostraram que plaquetas expostas ao DENV-2 apresentaram alterações morfológicas inerentes à ativação plaquetária como espalhamento, filopodia e agregação, bem como aumento da expressão de P-selectina. Além disso, a exposição ao DENV-2 induziu a secreção de IL-4, IL-13, GM-CSF, MCP-1 e TNF-alfa. Importantemente, a exposição de plaquetas ao DENV-2 inativado não levou a ativação plaquetária. Para melhor compreender o papel da atividade mitocondrial durante a ativação de plaquetas expostas ao DENV-2 nós inicialmente investigamos o papel funcional da mitocôndria em plaquetas quiescentes e ativadas por trombina (controle positivo de ativação plaquetária nesse estudo). Observamos que plaquetas apesar de consumir O2 para gerar potencial de membrana mitocondrial podem também mantê-lo através da hidrólise se ATP, um processo associado com a prevenção da apoptose em outros tipos celulares. Observamos...